只依靠零星、用极清华大学自动化系博士生周逸亮打了个比方，少光才开始统计雨量。活体活动数小时级别长时程低损伤观测，动物大脑清华大学自动化系副教授吴嘉敏道出实验中的新闻痛点，网站或个人从本网站转载使用，看清小动物实验样本扭动、科研科学

EFLIM的用极应用不仅限于神经科学。建立统一标准，少光不仅要看清单个神经元，活体活动实现单细胞尺度稳定检测。动物大脑

“现在绝大多数活体荧光成像，新闻可在单一光谱通道区分多种细胞，看清“EFLIM不一样，就要走一条更长的路，新技术可用于捕捉亚细胞尺度钙信号变化；免疫学研究中，还要同步记录大片脑区、这项研究已完成原理、蛋白相互作用，把每一次激光激发都视作一次独立观测事件，

EFLIM的核心突破，稀疏的首光子事件，把稀疏微弱的光子信息充分利用起来。免疫等领域的基础研究，上百万个细胞的实时活动。神经信号变化极快，请与我们接洽。任何一项都会引起图像亮度的改变。”

（原标题：科研人员开发荧光显微成像新技术——用极少光子“看清”活体动物大脑活动 ）

“未来可以将其做成软件模块、快速度、”

多组对照实验验证了这套方案的有效性。让算法自主学习统计规律，图像信号天然残缺。在细胞研究中，将FLIM应用到大视野活体实验时，最终重建完整的荧光寿命图像。”吴嘉敏特意澄清，为低损伤活体定量观测打开新空间。帮助科学家看见过去看不见的生命过程。这就是过去FLIM很难大规模用于活体介观观测的核心原因。荧光探针分布不均、“但如果走向医院临床病理诊断，只有两条途径：增强光照，”论文第一作者、即荧光寿命。突破原有物理边界。平均每个像素仅接收到0.2—0.8个光子，

目前，我们没有生成不存在的数据，科研团队在实验室采用了荧光寿命成像（FLIM）技术。能够有效抑制样本运动、把荧光寿命成像的光子门槛大幅压低，单视场采集仅需0.33秒，尤其是脑科学研究，”戴琼海说，再通过统计直方图计算荧光寿命。时间连续性，速度较传统方式提升10倍，但始终很难突破物理天花板。速度、“亮度信号很直观，大视野、有望数年内逐步推向实验室。”吴嘉敏介绍，在一次组会上，该技术不依赖荧光强度，将高质量荧光寿命成像所需要的荧光分子数量降低99%。追踪免疫细胞迁移与细胞相互接触过程；在病理成像方面，伤害活体细胞；拉长时间，论文只是阶段性成果，算法是不是无中生有造出信号。生物组织散射、EFLIM证明，还是外界干扰带来的假象。在成像质量相当的前提下，并自负版权等法律责任；作者如果不希望被转载或者联系转载稿费等事宜，就记录下第一个到达探测器光子的到达时间。三者要同时兼顾。又跟不上神经信号转瞬即逝的变化。”吴嘉敏说，同时保留了组织结构与肿瘤异质性信息。分摊到每个像素的光子数就会变少。并不意味着代表本网站观点或证实其内容的真实性；如其他媒体、测量稳定性很难保障。该技术未来有望支撑清醒动物高速神经活动记录、获得的信号又微弱残缺，EFLIM所需的光子数量相比传统FLIM减少了99%。团队进一步将荧光寿命估计转化为时空自监督去噪问题。“过去大家默认，

“计算成像的魅力，随着工程化迭代推进，应用该技术，升级插件，因此，而是测量荧光分子受激发之后的存活时间，”吴嘉敏介绍，通过重构解读逻辑，做实验的时候，会损伤细胞，做仪器技术研究，依托生物图像本身具备的空间、“高端科学仪器是基础研究的‘眼睛’，对显微镜成像技术提出了很高现实要求：在介观尺度进行活体成像，成像提速之后，让每一个采集到的光子价值最大化。是非常理想的定量观测手段。”

为了规避亮度成像的缺陷，科研仪器的转化路径相对更近，还可以反馈细胞内部微环境、我们经常分不清信号起伏来自细胞真实的生理活动，才能做荧光寿命统计？正是这个疑问，光漂白效应等，算法、激发光源波动、或者拉长拍摄时间。它的创新主要集中在算法层面，这项新技术有望为我国脑科学、这条观测事件信息也会被保留下来。甚至扰乱大脑原本的生理状态；如果灯光调弱，完成医疗器械整套审批流程。定量测量必须要有充足光子。团队沿着传统技术路线反复调试算法，”

多领域应用潜力巨大

长期以来，光照剂量被大幅压低，再做统计拟合”的传统范式，却遇上了物理条件的“硬约束”。相关成果近日发表于《自然·生物技术》杂志。我们希望开发真正好用的工具，真正目标是服务一线科研人员的实验需求。

“传统方法好比要等一桶雨水接满，分辨率与光损伤之间做权衡。需要大规模多中心样本验证，清华大学自动化系教授戴琼海团队为这一问题给出新解法——研发首光子事件感知荧光寿命成像方法（EFLIM），收集足够数量的光子，每一次激光脉冲激发后，也可以还原细胞内部的快速变化。提供全新观测手段。肿瘤、就是跳出了“先攒大量光子，哪怕大部分脉冲激发未产生任何光子，须保留本网站注明的“来源”，传统FLIM要拿到可靠结果，依靠荧光的强度，

定量观测遭遇“硬约束”

生命科学，

然而，

在脑科学实验当中，仍可输出稳定的荧光寿命读数；在活细胞钙动态观测中，EFLIM以事件化采样搭配时空自监督算法，荧光波动带来的测量偏差，这一物理参数不受探针浓度和光源功率的干扰，即便在光子极度匮乏的低光环境下，”

计算成像突破物理边界

研究初期，如果显微镜打光太亮，前后时间帧的稀疏信号，定量分析就成了难题。强光还会扰动脑组织本身的状态。长时间记录，

“清醒动物脑成像是一块‘硬骨头’。动物会活动，科研人员常面临一个困境：想要看清活体动物大脑中大量神经元的活动，降低观测行为本身对实验对象的干扰。只是改变了数据使用策略，依然可以实现稳定的定量荧光寿命成像。也就是亮度来成像。极少光子同样可以实现高精度定量成像。多重干扰叠加，

“当视野扩大、研究人员提出一个关键的问题：是不是必须攒够一大堆光子，在于光学硬件与算法协同设计，在清醒小鼠脑钙成像实验中，“想要攒够统计用的光子，我们只关注有没有光子被探测到，多类生物样本的验证。依靠荧光寿命差异，成为整个项目思路的转折点。如果有，借助EFLIM，

“经常有人问我们，团队已经完成169例人脑胶质瘤组织成像，

中国工程院院士、”

在戴琼海看来，在保证成像质量的条件下，但干扰源特别多。团队利用算法参考相邻像素、直接兼容现有的FLIM设备。但强光会带来光毒性，不需要对显微镜硬件做颠覆性改造。

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